ВОЗМОЖНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРЕПАРАТА ИНТЕРЛЕЙКИН-2
ПРИ ЛЕЧЕНИИ ОСТЕОСАРКОМЫ У СОБАК

Чуваев И.В. Институт Ветеринарной Биологии (Санкт-Петербург)
Сахарова Е.Д. ООО "Биотех" (Санкт-Петербург)

Изучена возможность применения препарата Ронколейкин^® (интерлейкин-2) при онкологических поражениях костной ткани у собак. В работе показано, что при развитии сарком у собак в сыворотке крови увеличивается содержание сиаловых кислот, а так же происходит изменение ряда других показателей крови. Внутривенное введение Ронколейкина^® в дозе 10 000 ед/кг больным животным и введение в рацион препарата Биоцефит, приостанавливает развитие онкологического процесса и приводит к частичной нормализации показателей крови.

Онкологические заболевания мелких домашних животных являются одной из наиболее трудноразрешимых задач современной ветеринарии.

При развитии злокачественных образований нередко прослеживается как породная так и возрастная предрасположенность. Так по данным литературы [3] и нашим наблюдениям, наиболее подвержены этому заболеванию породы собак группы догообразных такие как сенбернары, ротвейлеры, доги, боксеры. Более того, наиболее подвержены злокачественным образованиям области конечностей и головы [3, 14], при этом остеосаркома составляет до 80 % из всех онкологических поражений конечностей собак [9] что связанно, по-видимому, с высокой клеточной активностью в этих областях (особенно зоны метафизов), с травмами и нарушением заживления кости после иммобилизации [14].

Характерными особенностями остеосаркомы являются - скоротечность заболевания и очень низкая эффективность лечебных мероприятий. Так используемые на сегодняшний день и описанные в мировой литературе методы химиотерапии и оперативного вмешательства позволяют (при огромных финансовых затратах) продлить животному жизнь не более чем на один год, при постоянной поддерживающей терапии и сильных ограничениях жизненных функций животного. В связи с выше изложенным поиск новых методов и подходов к лечению (приостановке прогрессирования) остеосаркомы у собак является актуальной проблемой современной ветеринарии.

В настоящее время в медицине и ветеринарии появился целый ряд препаратов, действующим веществом которых являются белки активизирующие работу иммунной системы. Одним из них является рекомбинантный интерлейкин-2 человека (Ронколейкин^®, производимый ООО "БИОТЕХ", Санкт-Петербург, Пролейкин, производимый корпорацией "Кайрон").

Известно, что возникновение онкологических заболеваний связано с нарушениями в противоопухолевом иммунитете. В норме у здорового человека или животного в сутки образуется 100-1000 измененных клеток способных вызвать онкологические заболевания. Если иммунная система адекватно реагирует, то все эти клетки немедленно распознаются и уничтожаются. В том случае, если в иммунной системе произошел какой-то сбой, то происходит неконтролируемое размножение злокачественных клеток, которые, в свою очередь вырабатывают факторы, значительно усугубляющие иммунологическую недостаточность. Кроме того, проведение оперативных вмешательств, химиотерапии, лучевой терапии, гормональной терапии приводит к еще более значительному угнетению состояния иммунной системы. Таким образом, иммунные расстройства при злокачественных заболеваниях носят сложный комбинированный характер, требующий эффективной экзогенной коррекции на разных этапах противоопухолевой терапии [5].

Вторичный иммунодефицит при злокачественных заболеваниях характеризуется, главным образом, снижением количественных и функциональных показателей клеточного иммунитета: Т-лимфоцитов, натуральных киллерных клеток (NK-клеток), цитотоксических моноцитов и макрофагов, лимфокин-активированных киллеров (LAK-клеток), а также других клеток, обладающих противоопухолевой активностью - плазматических клеток и стволовых клеток. Кроме того, нарушается продукция регуляторных иммунных медиаторов и экспрессия их рецепторов на клетках иммунной системы: ИЛ-2, ФНО, γ-интерферона, ИЛ-6, ИЛ-4.

ИЛ-2 является ключевым звеном специфического иммунного ответа и противоопухолевой защиты. In vivo ИЛ-2 активизирует пролиферацию Т-лимфоцитов, увеличивает уровень экспрессии CD25, активирует опухоль-инфильтрующие клетки, стимулирует цитолитическую активность NK-клеток и секрецию ими γ-интерферона, колоний-стимулирующих факторов, ФНО, стимулирует секрецию Т-лимфоцитами ИЛ-2, ФНО, ИЛ-1, стимулирует секрецию моноцитами ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО, активирует продукцию В-клетками иммуноглобулинов, базофиллами - гистамина и др. [8].

Мировой опыт иммунотерапии онкологических заболеваний показал, что рекомбинантный ИЛ-2 (Ронколейкин^®) эффективен при комплексном лечении иммунозависимых опухолей, таких как: меланома [4], почечноклеточный рак [4], рак мочевого пузыря, колоректальный рак [1], некоторые виды опухолей головного мозга [7]. Кроме того, существуют случаи терапии при гемангиоэндотелиоме локализованной в печени [8] и при злокачественном плевральном выпоте [2].

Что касается остеосарком, то на данный момент в мире опубликован ряд научных работ, в которых показана возможность иммунотерапии остеосаркомы собак рекомбинантным IL-2 человека [12]. Эти работы послужили толчком для более детального изучения возможности использования Ронколейкина^® при лечении онкологических заболеваний, и в частности остеосаркомы у собак.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Под наблюдением находилось три собаки с диагнозом остеосаркома, поставленном на основании клинического осмотра, рентгенографического обследования, а так же клинического и биохимического исследования крови. Локализация злокачественных новообразований - локтевая кость в области лучезапястного сустава, голень в области скакательного сустава. Время от появления первых клинических признаков (отек, болезненность в области поражения, хромота) до обращения в клинику составило около одного месяца.

После постановки диагноза данным животным был назначен Ронколейкин^® из расчета 10000 МЕ/кг один раз в день внутривенно в течении пяти дней, а так же симптоматическая терапия. Кроме того, контроль за состоянием животных осуществляли методами клинического осмотра, рентгенологического обследования, наблюдениями за показателями клинической крови и концентрацией сиаловых кислот в сыворотке крови.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Как показали проведенные исследования у всех собак с остеосаркомой, кроме клинических и рентгенологических признаков наблюдалось повышенное содержание сиаловых кислот и характерные изменения клинической крови (Табл. 1).

Таблица 1. Влияние Ронколейкина^® на изменение содержания сиаловых кислот и показателей клинической крови у собак с остеосаркомой.

Примечание: С\к - сиаловые кислоты; СОЭ- скорость оседания эритроцитов; Эр - кол-во эритроцитов, Лк - количествово лейкоцитов; Лф - содержание лимфоцитов. * - разница достоверная по отношению к контролю Р<0,01

Как представлено в таблице 1, введение Ронколейкина^® в первые дни после лечения в значительной мере влияет на ряд показателей крови отражающих течение онкологического процесса. Так к 30 дню после начала лечения в сыворотке крови у животных опытной группы наблюдалось достоверное снижение уровня сиаловых кислот и показателя СОЭ, при этом содержание лимфоцитов крови достоверно возрастало (табл.1).

Данные изменения могут свидетельствовать о некой стабилизации физиологического состояния организма.

Помимо улучшения показателей крови, клинически можно было отметить локальную стабилизацию процесса: уменьшение отечности и воспалительного процесса, локализацию опухолевого процесса; улучшение общего состояния животного: повышение тонуса и двигательной активности, улучшение аппетита.

После проведения первого курса Ронколейкина^®, наблюдаемые животные получали Биоцефит из расчета 0.1 г/кг в течение одного месяца, затем был проведен второй курс по той же схеме. Показатели крови при этом оставались достаточно стабильными.

Через четыре месяца после начала лечения нами была проведена контрольная рентгеноскопия пораженных участков. На рентгенограмме не выявлено значимого прогрессирования патологии.
На основании представленных данных мы можем говорить о целесообразности включения препарата Ронколейкин^® в комплекс противоопухолевой терапии и дальнейшего его изучения.

Summary

Opportunity of medication Roncoleukin (interleukin-2) application was studied in treatment of oncological diseases of osteosarcoma in dogs. In the research it was demonstrated that during sarcoma development in dogs increase of sialic acids is observed as well as changes of some other blood indices. Intravenous infusion of Roncoleukin to sick animals in the dose 10000 units per kilogram together with addition of medication Biocephyt to food ration resulted in suspense of the cancerous growth and partial recovery of blood indices.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Гринев М.В. Первый опыт использования человеческого интерлейкина-2 (ИЛ-2) у пациентов с опухолевыми заболеваниями. / М.В. Гринев, Ю.Н. Цибин, М.Н. Тарелкина, М.И. Громов, Д.М. Широков, Л.П. Пивоварова, Г.М. Фролов и др. // Вестник хирургии. - 1995. - Том 154, №2. - С. 57-60.
2. Давыдов М.И. Иммунотерапия "интерлейкин-2/ЛАК" в течении больных злокачественным плевральным выпотом (опыт 10 наблюдений). / М.И. Давыдов, В.А. Нормантович, Б.Е. Полоцкий, М.В. Киселевский и др. // Вестник Московского Онкологического Общества. - 1998. - №9. - С. 3,6-7.
3. Лаковников Е.Л. Анализ исследований биоптатов от собак и кошек. / Е.Л. Лаковников, А.А. Кудряшов // Ветеринарная Практика. - 1999. - № 1(7). - С. 16-19.
4. Кравец Б.Б. Использование отечественного рекомбинантного дрожжевого интерлейкина-2 (Ронколейкина^®) в лечении больных меланомой кожи и раком почки. / Б.Б. Кравец, Ю.Н. Потапов, С.М. Костенко, А.И. Глотов // III Ежегодная Российская Онкологическая Конференция. СПб, 1999. Материалы.
5. Попович A.M. Сочетанное применение Ронколейкина^® и Беталейкина в иммунотерапии онкологических заболеваний. / A.M. Попович, М.Н. Смирнов, А.С. Симбирцев, М.И. Карелин // Медицинская иммунология. - 1999. - Том 1, № 3-4. - С. 129-130.
6. Попович А.М. Иммунотерапия Ронколейкином в онкологии. / А.М. Попович, М.И. Карелин, М.Н. Смирнов // Науч. конф. "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2000". СПб, 2000. Матер. симп. "Ронколейкин® - рекомбинантный интерлейкин-2 человека. Терапия вторичных иммунодефицитных состояний". - С. 8-11.
7. Свадовский А.И. Применение цитокиновой иммунотерапии в комбинированном лечении внутримозговых опухолей головного мозга. / А.И. Свадовский // V Международный симпозиум "Повреждения мозга". СПб, 1999. Материалы. - С. 440-449.
8. Сюсюкин А.Е.: Случай успешного применения иммунофармакотерапии интерлейкином-2 и интерфероном-альфа при гемангиоэндотелиоме. / А.Е. Сюсюкин, М.А. Карамуллин, С.Г. Щербак, С.А. Кетлинский, Н.М. Калинина, А.Н. Вельских, А.Л. Костюченко, И.А. Иванов // ВИЧ/СПИД и родственные проблемы. - 1997. - Том 1, № 1. - С. 147.
9. Bach-Nelson S. The use of doubling time in veterinary clinical oncology. / S. Bach-Nelson, J.S. Reif, R.S. Brodey // Journal of the American Veterinary Radiological Society. - 1976. - V.17. - P. 113-116.
10. Jeal W. Aldesleukin (Recombinant Interleukin-2). / W. Jeal, K.L. Goa // Bio Drugs. - 1997. - V. 7(4). - P. 285-317.
11. Khanna C. Interleukin-2 liposome inhalation therapy is safe and effective for dogs with spontaneous pulmonary metastases. / C. Khanna, P.M. Anderson, D.E. Hasz, E. Katsanis, M. Neville, J.S. Klausner // Cancer. - 1997. - V. 79, N 7. - P. 1409-21.
12. Mariani E. Lytic activity of IL-2 and IL-12 stimulated NK cells against HOS osteosarcoma cell line. / E. Mariani, A. Tarozzi, A. Meneghetti, M. Tadolini, A. Facchini // Boll Soc Ital Biol Sper. - 1996. - V. 72, N 1-2. - P. 21-7.
13. Ohnishi H. Successful in vivo generation of canine lymphokine-aktivated killer cells by continuous recombinant interleukin-2 infusion through the splenic artery. / H Ohnishi, K. Okuno, M. Yasutomi. // Cancer Biother. - 1993. - V. 8, N 3. - P. 213-22.
14. Stevenson S. Fracture associated sarcomas. / S. Stevenson // Veterinary clinics of North America. - 1991. - V.21. - P. 859-872.