Вестник Московского Онкологического Общества.
1998. № 9. С. 3, 6-7.

Иммунотерапия «интерлейкин-2/ЛАК» в лечении больных злокачественным плевральным выпотом
(опыт 10 наблюдений)

Давыдов М.И., Нормантович В.А., Полоцкий Б.Е., Киселевский М.В., Волков С.М.
Доклад: Казанова Г.В., Кулиш В.Л., РодионоваЛ.М., Ковригина А.М.,
Богатырев В.Н., Кадагидзе З.Г., Заботина Т.В., Короткова О.В.,
Кушлинский Н.Е., Огородникова Е.В., Алексеева Т.Р., Стрункина Т.С.,
Ветрова Н.А., Платинский Л.В., Марчук В.А., Спивак П.В.
НИИ Клинической Онкологии ОНЦ им. Н.Н. Блохина
Москва

В исследованиях 90-х годов [1-3] показана эффективность ИЛ-2/ЛАК иммунотерапии, путем внутриполостного введения рекомбинантного интерлейкина-2 (ИЛ-2; rIL-2) и лимфокин-активированных клеток (ЛАК-клеток, LAK) больным злокачественными опухолями, осложненными плевритом и/или асцитом. Эта методика адоптивной иммунотерапии повышала концентрацию цитокинов и ЛАК-клеток в области опухолевого процесса, что обусловливало возможность лизиса опухолевых клеток, без повреждения нормальных тканей.

В результате лечения замедлялось накопление экссудата, снижалась концентрация в нем опухолевых клеток, замедлялась (до 9 мес.) прогрессия опухолей. Так, в группе из 121 больного внутриплевральная ИЛ-2/ЛАК иммунотерапия способствовала значительному уменьшению (36,2%) и полному прекращению (58,6%) экссудации [1]. Обращала внимание удовлетворительная переносимость лечения, отсутствие побочных эффектов. Продолжение ИЛ-2/ЛАК иммунотерапии после уменьшения (прекращения) экссудации возможно с использованием, вместо лимфоидных клеток экссудата, лимфоцитов крови — как аутологичных, так и аллогенных лимфоцитов доноров [I]. Противоопухолевая (цитотоксическая) активность ЛАК-клеток, генерированных in vitro из лимфоцитов крови не уступала активности LAK-клеток из экссудата.

Следует отметить и перспективу существенного поддерживающего (симптоматического) эффекта благодаря возможности уменьшения (устранения) гипопротеинемии и гиповолемии в процессе ИЛ-2/ЛАК иммунотерапии. Как показали биохимические исследования, проведенные в ОНЦ, состав удаляемого экссудата аналогичен плазме крови. Центрифугирование экссудата и его разделение на клеточную часть (используемую для генерации ЛАК-клеток in vitro) и плазменную (обычно не утилизируемую), позволяет получить значительный объем плазмозамещающего раствора, внутривенная реинфузия которого могла бы способствовать поддержанию гомеостаза. Очевидно, что (после контроля стерильности и элиминации опухолевых клеток) реинфузия плазменной части экссудата сохраняет белки, электролиты, другие метаболиты, стереотипно удаляемые при стандартных тораколапароцентезах.

Таким образом, изучение возможностей ИЛ-2/ЛАК иммунотерапии при экссудативных формах злокачественных опухолей представляется перспективным направлением исследований, поскольку обуславливает возможности замедления опухолевой прогрессии, улучшения состояния больных.

Больные и методы

Сообщение основано на данных о 10 больных, лечившихся в ОНЦ (декабрь 1997 — август 1998) по поводу немелкоклеточного рака легкого (4), рака молочной железы (4), яичников и пищевода, у которых течение заболевания осложнилось злокачественным плевральным выпотом (опухолевым плевритом).

Наблюдались 2 мужчин и 8 женщин. Из них 3 — молодого (до 45 лет), 4 — среднего (от 46 до 60 лет) и 3 — пожилого возраста (60 и более лет). Их состояние, после удаления экссудата, расценивалось средней тяжести (9) и тяжелое (1). По шкале Карновского (Karnofsky performance scale, KPS) соответственно 50%<KPS<60% и KPS=40%. До начала rIL-2/LAK иммунотерапии в 8 случаях проводилась противоопухолевое лечение: лучевая (2) и химио (6) терапия, в том числе внутриплевральные введения химиопрепаратов у 2 больных раком молочной железы по поводу злокачественного плеврального выпота (с непродолжительным эффектом).

Перед началом rIL-2/LAK иммунотерапии из плевральной полости было эвакуировано 1,6-2,8 л серозно-геморрагического экссудата. Во всех случаях в экссудате цитологически подтверждалось наличие опухолевых клеток (плоскоклеточный рак — 3, аденокарцинома — 7).

Методика ИЛ-2/ЛАК иммунотерапии

Для ИЛ-2/ЛАК иммунотерапии плевральная полость дренировалась катетером (на 2-3 недели). Экссудат эвакуировался в стерильные емкости с гепарином и передавался в лабораторию клеточного иммунитета. Проводилось также обязательное цитологическое исследование экссудата для уточнения морфологии и количества (концентрации) опухолевых клеток.

В лаборатории экссудат разделялся центрифугированием на плазменную и клеточную фракции. Плазменная часть после цитологического контроля элиминации опухолевых клеток (в том числе дополнительным центрифугированием) и бактериологического контроля (с применением антибиотиков по показаниям) возвращалась в клинические отделения для внутривенной реинфузии. В клеточной части проводился подсчет концентрации опухолевых клеток. Лимфоциты, моноциты, макрофаги (мононуклеарные клетки, МНК) выделялись из клеточной части и помещались в культуральную среду, где они инкубировались с ИЛ-2 по специальной технологии в течение 2-5 суток. (При этом происходила генерация ЛАК-клеток, а опухолевые клетки подвергались разрушению активированными лимфоцитами). При недостаточном количестве лимфоцитов экссудата, ЛАК-клетки генерировались из крови больного или донорской крови. Затем, после 2-х кратного отмывания в физиологическом растворе, полученные ЛАК-клетки передавались в клинику и вводились в плевральную полость. Перед введением проводился цитологический и бактериологический контроль, а также анализ противоопухолевой активности (цитотоксичности) ЛАК-клеток на клеточной линии К-562 и аутологичных опухолевых клетках. Курс недельной ИЛ-2/ЛАК иммунотерапии начинался через день после катетеризации плевральной полости и ее осушения в течение 12-24 часов, предусматривал 4-5 ежедневных внутриплевральных введения rIL-2 (по 500 тыс-1млн ME) и 1-2 введения ЛАК-клеток (по 10-100 млн клеток). Для оценки эффекта (прекращения экссудации) требовалось 2 недельных курса лечения.

Результаты

В процессе исследования разработана собственная (модифицированная) методика получения ЛАК-клеток из МНК экссудата (либо из лимфоцитов крови). Эта сложная технология, включающая двойное высокоскоростное центрифугирование экссудата, позволила эффективно элиминировать опухолевые клетки, более точно тестировать киллерные свойства МНК экссудата и ЛАК-клеток на аутологичных опухолевых клетках.

Мононуклеарные клетки (МНК), выделенные из плеврального экссудата, обладали достаточно высокой противоопухолевой активностью (цитотоксичностью). Это подтвердили опыты на перевиваемой опухоли К-562: ЛАК-клетки генерированные из МНК экссудата лизировали в среднем 95% клеток указанной опухоли. Однако цитотоксичность МНК плеврального экссудата в отношении аутологичных (выделенных из экссудата) опухолевых клеток составила только 10-15%. Повышение (в 2-3 раза) противоопухолевой активности достигалось при генерации ЛАК-клеток из МНК экссудата. «Киллерная» активность ЛАК-клеток экссудата против собственных опухолевых клеток составляла 30-40%. Цитологический мониторинг генерации ЛАК-клеток in vitro показал, что через 3 суток активации МНК интерлейкином-2, в инкубируемой среде появлялись лимфоидные элементы различной степени зрелости, в них отмечались единичные митозы. На 5 сутки увеличивалось количество митозов, возрастало число активированных лимфоидных клеток с наличием бластов, что подтверждало выраженную пролиферацию лимфоидных элементов.

В плевральной полости к концу первого курса лечения (через 5- 7 суток) в результате введений ИЛ-2 и ЛАК-клеток, значительно уменьшалось количество опухолевых клеток, в которых появлялись признаки дегенерации. К концу второго курса опухолевые клетки, как правило, исчезали, а клеточный состав оказывался представлен преимущественно лимфоидными и гистиоидными элементами. Это кореллировало со значительным уменьшением (прекращением) экссудации.

Подтверждение возможности поддержания гомеостаза при инфузии экссудата отмечено в 4 случаях — у больных, находившихся в стационаре. Побочных эффектов не отмечено, переносимость инфузий плазменной части экссудата, очищенной от опухолевых клеток, удовлетворительная. Остальным больным, которым лечение проводилось амбулаторно, инфузий не производилось.

Исследование позволяет дать заключение об эффективности ИЛ-2/ЛАК иммунотерапии и по клиническим данным. Скорость накопления экссудата в первые 1-2 суток после его эвакуации (и до начала ИЛ-2/ЛАК иммунотерапии) составляла 200-350 мл/сутки. К концу 1 курса экссудация в 3 случаях полностью прекратилась, а в остальных значительно уменьшилась. Для достижения эффекта (прекращения экссудации) в 5 из остальных 7 случаев потребовалось 2 (недельных) курса лечения. Последующее течение заболевания (в течение 1-7 недель наблюдения) у этих больных не сопровождалось проявлениями опухолевого плеврита. В 2 случаях (у больных раком молочной железы, ранее леченных по поводу зл. плеврального выпота) эффект ИЛ-2/ЛАК иммунотерапии не удалось оценить с достоверностью, поскольку проведенное нами лечение не привело к полному прекращению экссудации.

В 8 успешных случаях ИЛ-2/ЛАК иммунотерапии прекращение экссудации позволило проводить динамическое наблюдение или продолжить лечение назначением химиотерапии. Использованный метод ИЛ-2/ЛАК иммунотерапии показал меньшую эффективность в случаях рака молочной железы, когда устранению экссудации способствовало (последующее) назначение химиотерапии и напротив, большая эффективность метода отмечена при немелкоклеточном раке легкого, т.е. при наименьших возможностях лекарственного лечения.

Обсуждение

Сведения литературы, а также опыт представленных наблюдений свидетельствуют о перспективности ИЛ-2/ЛАК иммунотерапии, поскольку разрабатываемый метод расширяет возможности противоопухолевого лечения. Преимуществом метода (сравнительно с химиотерапией) является его удовлетворительная переносимость. Обращает внимание возможность внутривенной инфузии экссудата, очищенного от опухолевых клеток, в качестве плазмозамещающего раствора. Перспективы метода связываются также с возможностью назначения системной химиотерапии (лучевой терапии) после устранения злокачественного плеврального выпота.

Литература *)
1. Liu X. et al. Treatment of 121 pts with malignant effusion due to anvanced lung cancer by intrapleural transfer of autologous or allogenic LAK cells combined with rIL-2. Chin. Med. J. 8(3): 186-9. 1993.
2. Suzuki H. et al. The intrapleural administration of rIL-2 to pts with malignant pleural effusion: clinical trials. Surg. Today (Japan) 23(12): 1053-9. 1993.
3. Matteucci P. et al. The concomitant intrapleural administration of IL-2 and LAK cells in locally advanced NSCLC. A case report. Tumori 80(3): 246-50. 1994.
*) См. также материалы 434 заседания Общества (30.1.97) — доклад Киселевский M.B., Нормантович В.А., Давыдов М.И. ЛАК-терапия в онкологии.

ЛАК клетки (т. е. Лимфокин-Активированные «Киллерные» клетки) мононуклеарные клетки, активированные экстракорпорально препаратом интерлейкин-2 — рекомбинантным аналогом одноименного эндогенного цитокина (лимфокина).
Цитокины — эндогенные биологически активные вещества, регуляторы иммунитета, медиаторы, вовлекающие клеточные элементы в защитную реакцию организма.

Согласно действующему законодательству, информация, предоставленная на сайте, предназначена для специалистов в сфере медицины и фармацевтики.

Пожалуйста, подтвердите, что Вы специалист в сфере здравоохранения.