Иммунология. 1996. № 5. С. 41-43.

Cравнительная оценка иммуномодулирующей активности отечественных рекомбинантных цитокиновых препаратов: дрожжевого интерлейкина-2 человека (Ронколейкин) и альфа2b -интерферона (Реальдирон)

Бутаков А. А., Щельцына Т. Л., Патютко М. Ю.
Институт иммунологии Минздрава РФ, Москва

Применение рекомбинантных цитокиновых препаратов в последнее время находит все более широкое применение. Основными показаниями к проведению цитокиновой терапии являются хронические вирусные инфекции (вирусный гепатит, герпетическая инфекция и др.) и онкологические заболевания [I]. Эта терапия может применяться как в комбинации с противовирусными препаратами (например, вместе с ацикловиром при тяжелых формах хронического герпеса) или противоопухолевой химиотерапией, так и самостоятельно [1,3,6].

Данные о эффективности использования различных иммуномодуляторов цитокинового ряда в онкологии весьма противоречивы. Однако на сегодняшний день считается, что наиболее эффективно их использование при меланоме, опухолях почки и метастатических опухолях толстой кишки [3]. Достаточно широко цитокиновая терапия применяется также при лечении лимфопролиферативных заболеваний и миеломной болезни [1,3, б].

Использование адъювантной иммунохимиотерапии при распространенных формах рака толстой кишки, позволяет, по имеющимся данным, значительно улучшить отдаленные прогнозы комбинированного лечения таких больных, снизить количество рецидивов и увеличить продолжительность жизни пациента [1, 4, 5].

Вместе с тем остается неясным, какие из используемых в настоящее время цитокиновых иммуностимуляторов наиболее эффективны при лечении больных с данной патологией. Имеются сообщения о достаточно хороших результатах применения препаратов альфа2b-интерферона в сочетании с цитостатической терапией [6], о повышении эффективности адъювантной химиотерапии при включении в схему лечения интерлейкина-2 (ИЛ-2) [3], а также о довольно высокой эффективности совместного применения этих препаратов в сочетании с 5-фторурацилом у онкопроктологических больных в III и IV стадиях заболевания [1, З]. Большинство исследователей связывают положительный эффект сочетанного применения химиотерапии и иммуномодулирующих препаратов цитокинового ряда не только с их иммунопротективным действием и снижением иммуносупрессорного влияния цитостатиков, но и с активацией противоопухолевого звена иммунитета — цитотоксических лимфоцитов и естественных киллерных клеток [2, 7]. Не исключается также возможность потенцирования действия химиотерапевтических препаратов препаратами интерферона и интерлейкинами [3].

Все изложенное выше позволило нам сформулировать основную задачу данного исследования: провести сравнительную оценку иммуностпмулирующего действия двух отечественных рекомбинантных препаратов цитокинового ряда — альфа2b-интерферона и ИЛ-2, наиболее часто используемых в клинической онкоиммунологии у больных с распространенными формами рака толстой кишки.

Методика исследований

В исследование были включены больные, перенесшие условно-радикальные и паллиативные операции по поводу распространенных форм рака толстой кишки III и IV стадий. Критериями постановки диагноза служили данные инструментального и клинического обследования, интраоперационный диагноз, результаты гистологического исследования Обязательным условием для включения больных в исследование было удаление во время операции первичной опухоли при наличии неудалимых опухолевых очагов (местное распространение заболевания или наличие отдаленных метастазов), а также сохранное состояние больных перед началом терапии (I-II степень тяжести состояния по шкале ВОЗ). Отбора больных по полу, возрасту и объему выполненных операций не проводили.

Терапия указанными выше препаратами проведена нами у 24 больных, перенесших условно-радикальные и паллиативные операции по поводу рака ободочной и прямой кишок. При этом 14 пациентам проведена терапия ИЛ-2, а 10 пациентам — альфа2b -интерфероном.

Среди больных, получавших ИЛ-2, было 8 (57,1%) женщин и 6 (42,9%) мужчин. Метастатическое поражение лимфоузлов во время операции отмечено у 11 (78,6%) пациентов, печени — у 9 (64,3%). У 6 (42,9%) больных имели место метастазы в лимфоузлы и поражение печени. На момент начала терапии ИЛ-2 у 5 (35,7%) больных при детальном обследовании (ультрасонография, колоноскопия, рентгенография легких, осмотр врачами-специалистами) признаков наличия злокачественной опухоли не выявлено, несмотря на то что интраоперационные находки были подтверждены при цитологическом и морфологическом исследованиях. У 9 (64,3%) больных при обследовании перед началом терапии обнаружены опухолевые очаги различной локализации.

Среди больных, получавших терапию альфа2b -интерфероном, женщин было 3 (30%), мужчин — 7 (70%) Метастазы в лимфоузлы в этой группе выявлены у 5 (50%) пациентов, поражение печени — у 6 (60%). Только у 1 (10%) больного интраоперационно обнаружены метастазы в парааортальные лимфоузлы и обе доли печени. Как и в группе больных, леченных ИЛ-2, в этой группе, несмотря на гистологическое подтверждение выставленного после операции диагноза распространенного рака, у 5 (50%) больных на момент начала проведения терапии альфа2b -интерфероном не было ни клинических, ни инструментально выявленных признаков наличия метастазов или рецидивов. Диагноз злокачественного образования перед началом терапии установлен также у 5 (50%) пациентов.

Необходимо отметить, что терапия использованными препаратами являлась лишь одним из этапов комбинированного лечения онкологических больных. На первом этапе у всех больных была удалена первичная опухоль, однако наличие неудалимых метастазов в лимфоузлы или печень не позволяло отнести операцию к радикальным. На втором этапе лечения больным проводили химиотерапию 5-фторурацилом по 750 мг/м² внутривенно капельно через день до суммарной курсовой дозы 4-7 г или фторафуром по 400-800 мг/сут в течение 30- 40 дней per os, до суммарной курсовой дозы 30-35 г. Незначительные различия в дозировках использованных химиопрепаратов связаны с различной переносимостью больными цитостатической терапии. Однако ни в одном случае побочные эффекты терапии не являлись основанием для ее прекращения и снижение дозы позволяло полностью их купировать. Тяжелых побочных эффектов химиотерапии (лейкопения, агранулоцитоз, развития инфекционных осложнении) ни в одном случае не отмечено.

После окончания химиотерапии больным проводили иммуностимулирующую терапию. На этом этапе внутривенно капельно вводили ИЛ 2 или альфа2b -интсрферон. Для ИЛ-2 разовая доза составляла 1 500 000 МЕ/м,² а для 2b -интерферона — 2 000 000 МЕ/м². Таким образом, однократно пациентам вводили около 2 000 000 ME ИЛ-2 или около 3 000 000 ME альфа2b -интерферона. Курсовая доза ИЛ-2 составляла не менее 10 000 000 ME, а альфа2b -интерферона — 15 000 000 ME. В обоих случаях препарат вводили болюсно разведенным на 500 мл стерильного физиологического раствора со скоростью не более 40 капель в 1 мин в течение 4-6 ч.

В качестве иммуномодулирующих препаратов использовали препараты Реальдирон — рекомбинантный человеческий альфа2b-интерферон («Ферментас», Вильнюс) и Ронколейкин — рекомбинантный дрожжевой ИЛ 2 («Биотех», Санкт-Петербург).

Перед началом терапии у больных проводили иммунологическое исследование, которое включало в себя оценку субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови методом проточной цитометрии с использованием моноклональных антител к CD3, CD4, CD8, CD16, CD45 и CD72, определение функциональной активности лимфоцитов периферической крови в реакции бласттрансформации на митогены, функциональной активности фагоцитирующих клеток периферической крови в реакции спонтанной и индуцированной опсонизированным зимозаном люминолзависимой хемилюминесценции (ЛЗХЛ) количества иммуноглобулинов классов М G и А в сыворотке крови методом радиальной иммунодиффузии по Манчини цитотоксической активности NK-клеток периферической крови капиллярным методом, спонтанной и стимулированной липополисахаридом (ЛПС) продукции фактора некроза опухоли ? (ФНО?) и ИЛ-1 мононуклеарами периферической крови in vitro, содержание ракового эмбрионального антигена (РЭА) в сыворотке крови.

Повторное исследование проводили на 3-4-й день после окончания иммунотерапии.

В соответствии с поставленной задачей основное внимание уделяли изменениям параметров иммунного статуса после проведенной терапии, оценке ее переносимости, частоте и тяжести побочных эффектов.

Результаты и обсуждение

В группе больных, получавших терапию Реальдироном, побочные реакции отмечены у 6 (60%) из 10 пациентов озноб во время введения препарата — у 5 (50%), лихорадка с повышением температуры тела до 39°С — у 4 (40%), тошнота — у 3 (30%), диарея — у 3 (30%) У 3 (30%) больных в течение 1 нед после окончания терапии отмечались явления стоматита, купировавшиеся самостоятельно.

Среди больных, леченных Ронколейкином, побочные реакции отмечены у 9 (64,3%) из 14 пациентов озноб на введение препарата — у 7 (50%), лихорадка с повышением температуры тела до 38,5-С — у 6 (42,8%), тошнота — у 5 (35,7%), диарея — у 4 (28,6%), стоматит, сохранявшийся в течение 5-7 дней после окончания терапии, — у 3 (21,4%).

При примененииРреальдирона и Ронколейкина ни в одном из наблюдений не было отмечено таких, описанных в литературе, осложнений, как развитие лейкопении или тромбоцитопении. Ни разу побочные реакции не превышали I-II степени выраженности. Оценивая эффективность терапии реальдироном и Ронколейкином, обращали внимание не только на динамику параметров иммунного статуса, но и на субъективно оцениваемые пациентом результаты терапии Так, в группе больных, получавших Реальдирон, б (60%) пациентов оценили эффект лечения как хороший, 3 (30%) больных не отметили изменения самочувствия, а 1 больной отметил ухудшение самочувствия после проведен-ной терапии.

Среди больных, получавших Ронколейкин, 12 (85,7%) пациентов отметили выраженный эффект терапии, проявившийся улучшением общего самочувствия, повышением аппетита и работоспособности, снижением утомляемости У 1 (7,15%) больного изменений в состоянии после проведенной терапии не произошло У 1 (7,15%) пациента с обширным метастатическим поражением печени сразу же после окончания терапии состояние ухудшилось появились боли в правом подреберье, желтуха, лихорадка с повышением температуры тела до 38,5%°С, все указанные симптомы были у него купированны назначением кортикостероидной терапии — преднизолон в дозе до 60 мг/сут.

Анализируя динамику параметров иммунного статуса у больных обеих групп, необходимо отметить, что выраженные положительные изменения ряда показателей наблюдались у 6 (60%) пациентов, получавших Реальдирон, и у 12 (85,7%) пациентов, получавших Ронколейкин. Динамика параметров иммунного статуса отсутствовала у 2 (20%) больных, леченных Реальдироном, и у 2 (14,3%) пациентов, получавших Ронколейкин. У 1 (10%) больного, леченного Реальдироном, и у 1 (7,15%) больного, получавшего Ронколейкин, отмечена отрицательная динамика параметров иммунного статуса после проведенной терапии.

Наиболее часто наблюдались выраженные изменения следующих параметров иммунного статуса (см .таблицу), процентного содержания лимфоцитов CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, содержания IgG в сыворотке крови, пролиферативного ответа лимфоцитов периферической крови на фитогемагглютинин (ФГА) в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ), цитотоксической активности NK-клеток периферической крови по отношению к опухолевым клеткам-мишеням К.562, функциональной активности фагоцитирующих клеток периферической крови в реакции спонтанной и зимозаниндуцированной ЛЗХЛ, спонтанной и индуцированной ЛПС продукции мононуклеарными фагоцитами периферической крови цитокинов ФНО? в супернатантах 24-часовых клеточных культур Изменения количества иммуноглобулинов классов М и А, процентного содержания клеток CD72+, общего количества лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови, сывороточного уровня РЭА носили разнонаправленный характер и в целом по группам были статистически недостоверными.

Таким образом, проведенное нами сравнительное изучение эффективности действия двух отечественных рекомбинантных лекарственных препаратов Реальдирона и Ронколейкина показало, что оба препарата обладают иммуномодулирующей активностью при их применении у больных с распространенными формами рака толстой кишки. При этом положительная динамика параметров иммуного статуса отмечена у 85,7% больных, получавших ронколейкин, и у 60% больных, леченных Реальдироном Клиническое улучшение состояния наблюдалось соответственно у 78,6 и 60% пациентов Количество и тяжесть побочных эффектов от проводимой терапии были сопоставимыми в обеих группах.

Полученные нами данные позволяют сделать вывод, что Ронколейкин обладает иммуномодулирующей активностью (повышение ряда параметров клеточного иммунитета), не уступающей активности таковой у препарата Реальдирона. Введение Ронколейкина не вызывает тяжелых побочных эффектов и, следовательно, его можно применять в качестве иммуномодулирующего препарата при развитии иммунодефицитных состояний у онкологических больных Оценка клинической эффективности сочетания иммуно- и химиотерапии не входила в задачу настоящего исследования. Для ее проведения необходимо изучить отдаленные результаты терапии и провести исследования у различных групп онкологических больных, что может быть выполнено только при участии специалистов-онкологов.

Литература

Summary

Comparative Assessment of Immunomodulating Activity of made in Russia Recombinant Cytokin Preparatoins Yeast Human Interleukin-2 (Ronkoleukin) and Alpha2b-interferon (Realdiron)
Butakov A.A., Scheltsyna T.L., Patyutko M.Yu.
Therapy with Russian recombinant cytokine preparations ronkoleukin (interleukin-2) and realdiron (alpha2b-interferon) was performed in 24 patients with advanced colon cancer. The toler ance was satisfactory, side effects (high body temperature, chill, nausea, diarrhea) were moderate and comparable for both groups. Positive trend occurred in cellular immunity in both Realdiron-alpfa2b-interferon and Ronkoleukin-treated patients. Ronkoleukin is recommended for cored for correction of immune status in secondary immunodeficiency in cancer patients and for combined therapy of advanced cancer.