УДК 619:617.3:619.7:612.017:617.089

ДИНАМИКА ИММУНОМОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБАХ ОПТИМИЗАЦИИ ОСТЕОГЕНЕЗА В УСЛОВИИ ЭКСТЕРНАЛЬНО-СТЕРЖНЕВОЙ ФИКСАЦИИ

И.Ю. Гессе. ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ», г.Саратов

Все цитокины являются белками с низкой молекулярной массой (9–80 кД), секретируемыми различными типами клеток организма. Из более чем 100 цитокинов 70 продуцируется либо только Т-клетками, либо ими же наряду с другими клеточными типами (макрофагами, фибробластами, В-клетками и т.д.).

Рекомбинантный интерлейкин-2 (ИЛ-2) человека получают современными биотехнологическими методами из клеток продуцента - рекомбинантного штамма пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Препарат активирует процессы репарации и регенерации тканей (О.В. Крячко, О.В. Романова, 2002).

Полиоксидоний был включен в опыт, так как имеет прямые показания к применению для активации регенераторных процессов (переломы, ожоги). Он оказывает прямое воздействие на фагоцитирующие клетки и естественные киллеры (Ю.А. Ватников, 2002).

Исходя из выше сказанного, мы поставили перед собой цель оптимизировать остеогенез, воздействуя не локально на зону перелома, а активизируя клеточные и гуморальные звенья иммунитета; изучить динамику иммунологических показателей при лечении животных с переломами трубчатых костей, а также обосновать экономическую эффективность применения Ронколейкина^® с целью индукции репаративного остеогенеза.

У экспериментальных животных (кроликов) моделировали перелом голени, после чего устанавливали аппарат внешней фиксации стержневого типа. У всех групп проводили превентивную постоперационную терапию.

Животным первой группы вводили Ронколейкин^® подкожно в дозе 20000 ЕД/кг на 1, 2, 4 сутки терапии. Кроликам второй группы – Полиоксидоний внутримышечно на 3, 4, 5, 9, 10, 11 сутки терапии. Для сравнительной статистики третья группа была контрольной. Забор крови производили из ушной вены до установки аппарата внешней фиксации и на 1, 10, 20, 30 сутки лечения.

Все гематологические показатели исследовались общепринятыми в ветеринарии методами.

В течение всего курса лечения проводили исследования наиболее информативных иммунологических показателей: интерлейкина-4 (ИЛ-4), интерферона-гамма (γ-ИНФ), фактора некроза опухоли-альфа (ФНО-α).

Исследуя динамику концентрации ИЛ-4 в крови опытных животных, мы установили, что в первой группе (Ронколейкин^®) его количество достоверно повышалось в течение первых 10 суток после операции (14,82 пг/мл до 34,67 пг/мл) (р = 0,0228) и в последующие 9 дней (55,38 пг/мл) (р = 0,0053), затем снижалось (27,34 пг/мл). Во второй группе (Полиоксидоний) имелась похожая тенденция роста ИЛ-4, но показатель продолжал достоверно повышаться до 20 суток: с 17,5 до 40,14 пг/мл (р = 0,0095) в первые сутки операции, затем до 61,96 пг/мл (р = 0,0346) к 10 суткам и достиг 80,90 пг/мл (р = 0,0028) на 20-е сутки опыта. Достоверное снижение до 61,12 пг/мл (р = 0,0183) наблюдается к 30-м суткам после операции. В контрольной группе концентрация ИЛ-4 в крови повышалась в течение 10 суток и достигла 39,02 пг/мл (р = 0,0333), затем наблюдалось незначительное снижение до 34,16 пг/мл (р = 0,0005). Однако в последние дни опыта показатель снова повышался на 2,9 пг/мл.

Концентрация γ-ИНФ в первой группе (Ронколейкин^®) с начала опыта и до 20-х суток после операции стабильно достоверно повышалась с 22,24 до 50,38 пг/мл: в первые сутки после операции до 25,54 пг/мл (р = 0,0441), в последующие 10 суток – до 66,46 пг/мл (р = 0,0409) и далее до 74,62 пг/мл. За последние 10 суток опыта происходило резкое снижение до 47,38 пг/мл (р = 0,0118). Во второй группе наблюдалась аналогичная динамика уровня γ-ИНФ в крови в те же сроки, но с более низкими показаниями: в первые сутки с 22,14 до 30,26 пг/мл (р = 0,0063), с 1 по 10 сутки после операции до 35,08 пг/мл, с 10 по 20 сутки до 46,84 пг/мл (р = 0,0421), а далее снижение в течение 10 суток на 14,54 пг/мл (до 32,3 пг/мл с достоверностью р = 0,0169). В 3 группе динамика показателя в течение первых 10 суток недостоверна, однако с 10 по 20 сутки зарегистрировано достоверное значительное повышение с 49,13 до 79,86 пг/мл (р = 0,0059) и затем снижение к 30 суткам до 55,78 пг/мл (р = 0,0184).

ФНО-α активизирует гранулоциты, макрофаги, остеокласты и хондроциты (резорбция костной и хрящевой ткани). Показания ФНО-α в первой группе имели достоверную положительную динамику только в первые сутки опыта с 12,9 до 30,67 пг/мл (р = 0,02). Далее происходило плавное снижение на протяжении всего опыта достигая к 30 суткам 24,18 пг/мл. Во второй группе (Полиоксидоний) ФНО-α имел достоверную динамику на протяжении всего опыта: в первые сутки после операции показатель повышался с 8,94 до 25,6 пг/мл (р = 0,0061) и продолжал расти до 35,78 пг/мл на 20-е сутки (р = 0,0091). Последние 10 суток показатель снижался до 23,84 пг/мл (р =0,0043). В третьей группе (контроль) при втором заборе крови наблюдался резкий скачок с 16,24 до 35,7 пг/мл (р = 0,0252). В дальнейшем достоверных изменений в динамике ФНО-α на протяжении последующих 30 суток мы не наблюдали.

Проведенный эксперимент позволяет судить об изменениях в нейтрофильной группе (сдвиг влево), что свидетельствует о тяжести травматической болезни, а эозинофилия (3,18 %) и лимфоцитоз (2,9 %), развившиеся в опытных группах к 20-суточному сроку наблюдения (р.0,05), позволяют говорить об иммуномодулирующем влиянии ронколейкина.

Нормализация уровня цитокина (ИЛ-4) к 20 суткам эксперимента в опытной группе с использованием ронколейкина и повышение в ней количество маркеров клеточного иммунитета (γ-ИНФ, ФНО-α) к окончанию периода наблюдения могут свидетельствовать о противовоспалительном влиянии цитокинового иммуномодулятора и активизации им В-клеточного звена иммунитета.

Предложенный способ контроля цитокинового статуса репаративного остеогенеза отражает принципианьно новый лечебно-диагностический подход, позволяющий строго дозированно, избирательно и направленно воздействовать на клетки, вовлеченные в патологический процесс с целью коррекции нарушения их функциональной активности.