Иммунология, аллергология, инфектология.

2003.  №2. С.98-101.

 

Содержание цитокинов в сыворотке крови больных

хроническим гепатитом С при интерферонотерапии и

комбинированной терапии  альфа-интерфероном и

Ронколейкином®

 

Мицура В.М., Жаворонок С.В., Красавцев Е.Л., Павлович И.Л.¹,
Суетнов О.Н.², Грушко Т.П.²

Гомельский государственный медицинский институт,

¹Гомельская областная инфекционная клиническая больница,

²Гомельский областной центр профилактики СПИД,

Беларусь

 

Проведено сравнение уровней цитокинов: фактор некроза опухоли альфа (ФНО-α), ИЛ-1β,  ИЛ-2, ИЛ-4 в сыворотке крови больных хроническим гепатитом С при интерферонотерапии и комбинированной терапии альфа-интерфероном и Ронколейкином^®. Установлено повышение уровней всех исследованных цитокинов на фоне интерферонотерапии по сравнению с донорами. Монотерапия препаратами α-ИФН способствует усугублению имеющегося дисбаланса цитокиновой системы, что, возможно, ведет к снижению эффективности терапии. Применение препарата рекомбинантного ИЛ-2 (Ронколейкин^®) на фоне интерферонотерапии способствует устранению дисбаланса цитокиновой регуляции, что позволяет повысить эффективность лечения.

 

 

В патогенезе хронического гепатита С (ХГС) большое значение имеет состояние иммунной системы, в частности, ее Т-клеточного звена. Т-лимфоциты-хелперы (Tх) играют существенную роль в регуляции иммунного ответа. Tх0 клетки дифференцируются на 2 группы, разделяемые в зависимости от профиля вырабатываемых ими цитокинов: Tх1 и Tх2. Тх1 стимулируют Т-клеточный ответ и цитотоксичность Т-лимфоцитов и вырабатывают интерферон-γ (ИФН-γ), интерлейкин-2 (ИЛ-2), фактор некроза опухоли (ФНО-α) и др. Тх2 стимулируют гуморальное звено иммунитета и вырабатывают ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-10 и др. [4, 5]. Нарушение баланса продукции цитокинов Tх1/Tх2 клетками имеет большое значение в патогенезе хронизации и прогрессирования HCV-инфекции. Иммунный ответ по Tх1 типу способствует элиминации вируса, а по Tх2 типу – персистированию инфекции [1, 3, 9]. По функциональной активности цитокины разделяют на провоспалительные  (ИЛ-1β, ФНО-α, ИФН-γ) и противовоспалительные (ИЛ-4, ИЛ-10) [4, 5].

Фактор некроза опухоли- α (ФНО-α) активирует Т- и В- лимфоциты, естественные клетки-киллеры, опосредует гепатотоксический эффект, принимает участие в апоптозе поврежденных (в том числе вирусом) клеток. Повышение уровня ФНО-α в сыворотке крови характеризует процессы воспаления и элиминации клеток путем прямой цитотоксичности или апоптоза. При ряде воспалительных и аутоиммунных заболеваний уровень ФНО-α отражает тяжесть патологического процесса [4, 8].

ИЛ-1β продуцируется мононуклеарами периферической крови. Повышение ИЛ-1β в сыворотке крови сопутствует целому ряду заболеваний воспалительного и аутоиммунного характера [4,8]. ФНО-α и ИЛ-1β способны активировать звездчатые клетки печени, играющие ключевую роль в фиброгенезе печени [6]. Кроме того, ФНО-α и ИЛ-1β способствуют развитию жировой инфильтрации печени и могут подавлять регенерацию печеночной ткани [9].

ИЛ-2 – регуляторный цитокин, способный компенсировать проявления иммунной недостаточности, восстанавливать баланс Тх1 и Тх2 – лимфоцитов, что ведет к регуляции продукции противо- и провоспалительных цитокинов. Снижение индуцированной продукции ИЛ-2 является одной из характеристик Т-клеточного иммунодефицита. Дефицит продукции ИЛ-2 часто определяется при ХГС [2, 7, 10]. Повышение уровня ИЛ-2 в сыворотке крови происходит при ряде аутоиммунных заболеваний, а также при иммунном ответе на массивное поступление инфекционного антигена [4, 8]. Введение интерферона альфа-2b вызывает кратковременное повышение сывороточной концентрации ИЛ-2, особенно у пациентов, впоследствии ответивших на лечение препаратами интерферона [11].

ИЛ-4 – представитель противовоспалительных цитокинов. Повышение уровня ИЛ-4 в сыворотке крови сопровождает системный Тх2-ответ, что встречается при аллергических реакциях [8] и при хронических вирусных инфекциях [4].

Цитокины крови инактивируются в печени. Нарушение этой инактивации при болезнях печени может служить причиной иммунных нарушений [9].

В настоящее время основным способом этиотропного лечения ХГС с доказанной эффективностью является применение a-интерферона (a-ИФН) [3, 9, 10]. Препараты α-ИФН обладают большей противовирусной, но меньшей иммуномодулирующей способностью, чем интерферон-γ [4]. В частности, препараты α-ИФН обладают цитостатическим действием, что может вызывать ряд неблагоприятных эффектов: миелодепрессия, аллопеция, нарушение пищеварения, изменения психики [4, 9].  Поскольку при ХГС частота достижения как первичной, так и стабильной длительной  ремиссии на фоне лечения интерфероном низка, продолжается поиск путей повышения эффективности интерферонотерапии. С этой целью применяются препараты с иммуномодулирующей активностью, в частности, препарат рекомбинантного интерлейкина-2 (Ронколейкин^®) [2, 7].

Цель исследования: изучить закономерности циркуляции цитокинов ФНО-α, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-4 в сыворотке крови больных хроническим гепатитом С при интерферонотерапии и комбинированной терапии альфа-интерфероном и Ронколейкином^®.

Материалы и методы.

Исследовалось содержание цитокинов  ФНО-α, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-4 в сыворотках крови 59 больных хроническим гепатитом С, находившихся на лечении в Гомельской областной инфекционной клинической больнице в 2000 – 2002 годах. У 17 больных исследование цитокинового профиля проводилось в динамике.

Диагноз у всех больных был подтвержден обнаружением антител к HCV (анти-HCV) и РНК HCV методом полимеразной цепной реакции у 40 человек.

В зависимости от получаемой терапии больные были разделены на 3 группы. К I группе отнесено 35 больных ХГС, получающих патогенетическое и симптоматическое лечение. Ко II группе – 20 больных ХГС, получающих препараты α-ИФН не менее 1 месяца. К III группе отнесен 21 пациент, получивший курс рекомбинантного интерлейкина-2 (Ронколейкин^®) на фоне лечения препаратами α-ИФН (курс включал 16 внутривенных инфузий по 500 000 МЕ 2 раза в неделю Ронколейкина^® в течение 8 недель).

Интерферонотерапия проводилась препаратами реальдирон, роферон, интрон А, с введением препарата в дозе 3 млн МЕ 3 раза в неделю. Один пациент получал в течение 1 месяца роферон в дозе 6 млн МЕ 5 раз в неделю, с последующим переходом на стандартную схему лечения. 3 пациента получали комбинированную терапию с рибавирином. Одна пациентка в течение 12 месяцев получала препарат пегилированного интерферона ПЭГ-интрон в дозе 100 мг 1 раз в неделю.

Препарат рекомбинантного интерлейкина-2 (Ронколейкин^®) назначался при отсутствии или минимальной биохимической активности с целью стимуляции клеточного звена иммунитета перед курсом интерферонотерапии или в процессе лечения α-ИФН. У 3 пациентов, не ответивших на курс монотерапии интерфероном, Ронколейкин^® назначался при назначении повторного курса интерферонотерапии.

Изучение цитокинов проводилось на базе иммунологической лаборатории Гомельского областного центра профилактики СПИД с использованием иммуноферментных тест-систем, производимых фирмой «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург).

В качестве контроля использовались 10 образцов сыворотки доноров, постоянно проживающих в Гомеле и Гомельской области и не имеющих хронических заболеваний и маркеров инфицирования вирусами парентеральных вирусных гепатитов.

Статистический анализ полученных данных проводился на персональном компьютере с помощью программы STATISTICA v.5.0. Учитывая отсутствие нормального распределения уровней цитокинов, был использован непараметрический критерий Манна-Уитни.

Результаты и их обсуждение.

 Методом иммуноферментного анализа проведено количественное определение цитокинов в исследуемых сыворотках крови в соответствии с инструкциями по применению тест-систем. Результаты исследования представлены в таблице 1 (указано среднее значение концентрации цитокинов в пг/мл, в скобках указаны значения p при сравнении показателей больных I—III групп и доноров).

 

Таблица 1.

Уровни цитокинов в сыворотке крови при ХГС в зависимости от получаемой терапии

 

 

Примечание. * — достоверные различия (p<0,05) между группами доноров и больных ХГС, получающих различную терапию.

Как видно из таблицы 1, у больных I группы уровень всех цитокинов превышает аналогичные показатели в группе доноров. Превышение уровней ИЛ-1β и ФНО-a статистически значимо, что свидетельствует об активном воспалении печеночной ткани в данной группе больных ХГС.

У больных II группы уровни всех исследованных цитокинов превышают как показатели доноров, так и больных I и III групп. Уровень ИЛ-2 во II группе достоверно превышает показатели ИЛ-2 в группе доноров и больных III группы. Это может быть связано со способностью  препаратов a-ИФН кратковременно повышать уровень ИЛ-2 в сыворотке крови [11], или с развитием аутоиммунных реакций на фоне лечения. Показатели провоспалительных цитокинов ИЛ-1β и ФНО-a достоверно превышают уровни этих цитокинов в группе доноров, и выше показателей у больных I группы, что говорит о прогрессировании воспалительных изменений в печени на фоне интерферонотерапии.

После лечения Ронколейкином^® (III группа) уровни цитокинов ниже, чем в I и II группах, хотя уровень ИЛ-1β достоверно выше, чем у доноров. Уровни ИЛ-2 и ФНО-a достоверно снижены по сравнению со II группой. Применение препарата Ронколейкин^® на фоне терапии a-ИФН снижает уровень провоспалительных цитокинов в сыворотке крови (достоверно для ФНО-a, p=0,032). Терапия Ронколейкином^® не приводит к стойкому повышению уровня ИЛ-2 в сыворотке крови.

Уровень ИЛ-4 у больных ХГС I, II и III групп недостоверно повышен по сравнению с группой доноров, что характеризует иммунный ответ при ХГС преимущественно по Тх2-типу. При этом уровень ИЛ-4 в III группе наиболее близок к среднему значению в группе доноров, что может говорить о способности Ронколейкина^® регулировать баланс Тх1/Тх2 цитокинов.

Изменение уровней провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в сыворотке крови может иметь важное диагностическое и прогностическое значение и требует дальнейшего изучения.

Выводы:

1.      В сыворотке крови больных ХГС по сравнению с донорами наблюдалось повышение уровней всех исследованных цитокинов, наиболее выраженное на фоне интерферонотерапии.

2.      Избыточное содержание провоспалительных цитокинов ИЛ-1β и ФНО-a поддерживает воспалительный процесс в печени и может способствовать усилению фиброгенеза в печени больных ХГС.

3.      Монотерапия препаратами a-ИФН усугубляет имеющийся дисбаланс цитокиновой системы, что, возможно, ведет к снижению эффективности терапии.

4.      Применение препарата Ронколейкин^® на фоне интерферонотерапии способствует устранению дисбаланса цитокиновой регуляции, что позволяет повысить эффективность лечения.

 

Литература

1.      Абдукадырова М.А. Прогностические маркеры хронизации вирусного гепатита С. //Иммунология. — 2002-№1-с.47-54.

2.      Журкин А.Т., Фирсов С.Л., Маркова М.В. Влияние интерлейкина-2 на иммунологические и биохимические показатели больных гепатитом С. //Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2001-№5-с.28-31.

3.      Ивашкин В.Т., Маммаев С.Н., Лукина Е.А. и др. Особенности иммунного ответа у больных хроническим вирусным гепатитом С. //Рос. журн. гастроэнтерол. — 2001-№3-с.24-29.

4.      Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Иммунология для врача. — СПб.:-Гиппократ, 1998-156 с.

5.      Курамшин Д.Х., Толоконская Н.П., Силков А.Н. и др. Содержание цитокинов Тх1 и Тх2 типа в сыворотке крови больных гепатитом С. //Журн. микробиол. — 2001-№1-с.57-61.

6.      Пинцани М. Эволюция фиброза печени: от гепатита к циррозу. //Рос. журн. гастроэнтерол. — 2002-№5-с. 4–9.

7.      Скляр Л.Ф., Маркелова Е.В.  Клинико-иммунологическая эффективность применения ронколейкина при лечении хронического вирусного гепатита С. //Здравоохранение Урала. — 2002-№5 (11)-с. 39-43.

8.      Справочник по иммунотерапии для практического врача. (Под ред. Симбирцева А.С.).- М.: — Диалог, 2002 — 480 с.

9.      Шерлок Ш., Дули Дж. Заболевания печени и желчных путей: Практич. рук.: Пер. с англ. – М.: — Гэотар Медицина, 1999 — 864с.

10.  Яговдик-Тележная Е.Н. Состояние системы интерлейкинов-1 и -2 при вирусных гепатитах. Автореф… к.м.н. — Минск, 1999

11.  Mazur W, Mazurek U, Jurzak M et al. Short-term changes of serum IL-2 and IL-6 induced by interferon alpha-2b in patients with chronic hepatitis C. //Med Sci Monit 2001 May;7 Suppl 1:151-6.